Ffliw{0}} AM Pecyn Canfod Calsiwm Lon Fflwroleuol

Mae Fluo{0}} yn fersiwn wedi'i huwchraddio o Fluo-3 a ddefnyddir yn gyffredin mewn arbrofion canfod ïon calsiwm biolegol, y prif wahaniaeth yw bod fflworin yn cymryd lle'r ddau atom clorin ar y moleciwl Ffliwo{-3AM Ffliw-4AM, a gall y newid bach yn yr adeiledd wneud Fflw-4AM lwytho'n gyflymach ac mae'r signal canfod yn gryfach ar yr un crynodiad. Oherwydd bod y grŵp AC o chwiliwr Ffliw yn cwmpasu rhan foleciwlaidd calsiwm chelated Fflw ond hefyd yn gwella ei hydroffobigedd, gall dreiddio'n hawdd i'r gellbilen fyw a mynd i mewn i'r gell. Pan fydd Fluo{7}}AM yn mynd i mewn i'r gell, bydd yn cael ei glipio i Ffliw-4 gan lactas, gan aros felly yn y gell. Ychydig o fflworoleuedd sydd gan ffliw-4 ei hun, ond o'i gyfuno ag ïonau calsiwm mewngellol, gall gynhyrchu fflworoleuedd cryf. Mae dwyster y fflworoleuedd yn gymesur â'r cynnwys calsiwm mewngellol.

Mae'r pecyn hwn yn seiliedig yn bennaf ar yr egwyddorion canfod uchod, Fluo-4AM fel y prif gorff, ac mae'n darparu byffer paru arbennig, synhwyro hawdd ei ddefnyddio, mwy sensitif. Gellir mesur cynnwys ïonau calsiwm mewn celloedd byw neu newid deinamig ïonau calsiwm mewn celloedd trwy ficrosgop fflworoleuedd, dadansoddwr llif, labelwr ensymau, ac ati.

Llong gyda rhew sych; Storio -20 gradd i ffwrdd o olau, yn ddilys am 12 mis.

Nodyn: Mae'r amseroedd ymateb cit uchod yn cyfateb i'r 96-system assay platennau.

1. Paratoi cyn arbrawf: Mae celloedd yn cael eu brechu mewn 96-blatiau ffynnon a'u trin ymlaen llaw yn unol â'r pwrpas arbrofol;

2. Ffurfweddiad Ffliw -4 datrysiad gweithio AM: Paratoi datrysiad gweithio Fluo-4 AM yn ôl yr angen, gellir cyfeirio'r system ffurfweddu at y tabl canlynol, nodwch fod gwahanol nodweddion celloedd yn wahanol, yn ôl gall sefyllfa wirioneddol yr arbrawf gael ei ychwanegu neu leihau crynodiad y stiliwr a ddefnyddir, y gymhareb gwanhau a argymhellir cychwynnol o 1:500;

3. staenio marcwyr (gyda chelloedd ymlynol fel enghraifft; cell atal dros dro angen newid hylif bob tro, felly os gwelwch yn dda perfformio centrifugation gan eich hun):

3.1. Tynnwch y cyfrwng meithrin celloedd gwreiddiol a golchwch y celloedd 2-3 amseroedd gyda PBS neu glustogau eraill;

3.2. Tynnwch y byffer golchi, ychwanegwch hydoddiant gweithio 100μL Fluo-4 AM i bob ffynnon, a deorwch mewn deorydd cell ar 37 gradd am 30 munud i ffwrdd o'r golau;

3.3. Tynnwch yr hydoddiant gweithio Fluo-4 AM ar ddiwedd y deor a golchwch y celloedd 2-3 gwaith gan ddefnyddio PBS neu glustogau eraill;

3.4. Rhoi byffer canfod ïon calsiwm yn ei le a pharhau i ddeor am 15-30munud i sicrhau hydrolysis digonol o Fflwo-4AM mewn celloedd (dewisol);

4. Canfod fflworoleuedd: Defnyddiwch ficrosgop fflworoleuedd, marciwr ensymau ac offerynnau eraill i gyflawni ei ganfod. Mae ffliw-4 AM yn fflwroleuol gwyrdd gydag EX/EM ≈ 494/528 nm.

1. Oherwydd gwahanol briodweddau rhynggellog a gwahanol ddulliau cyn-driniaeth, mae'r gymhareb defnydd stiliwr a'r ystod amser deori a ddisgrifir yn y camau ar gyfer cyfeirio yn unig a gellir eu haddasu yn ôl amgylchiadau penodol.

2. llifynnau fflwroleuol wedi problemau diffodd, os gwelwch yn dda yn talu sylw i osgoi gweithrediad ysgafn i arafu'r diffodd fflworoleuedd.

3. Mae ffliw-4AM yn sensitif iawn i leithder, felly paciwch ef yn iawn yn ôl y trefniant arbrofol wrth ei ddefnyddio am y tro cyntaf. Dylai'r Ateb Gweithio Assay Fluo-4 AM fod yn barod i'w ddefnyddio.

4. Mae rhywfaint o wlybaniaeth ar ôl dadmer yn ffenomen arferol, ac mae'n cael ei ysgwyd yn llawn cyn ei ddefnyddio i sicrhau ei fod wedi'i ddiddymu'n llwyr.

5. Yn seiliedig ar egwyddor weithredol y stiliwr hwn, nid yw'n bosibl trin y celloedd fel sefydlogiad neu drydylliad.

6. Er eich iechyd a'ch diogelwch, gwisgwch gôt labordy a menig yn ystod y llawdriniaeth.

At Ddefnydd Ymchwil yn Unig!

Tagiau poblogaidd: fflwo-4 am becyn canfod calsiwm lon fflwroleuol, fflworoleuol Tsieina-4 gweithgynhyrchwyr pecyn canfod calsiwm fflwroleuol lon, cyflenwyr, ffatri