SweScript RT I Llinyn Cyntaf Pecyn Synthesis CDNA

 

Enw Cynnyrch	Cath. Nac ydw.	Spec.
SweScript RT I Llinyn Cyntaf Pecyn Synthesis cDNA	G3330-50	50 rxns
	G3330-100	100 rxns

 

 

Mae Pecyn Synthesis Llinyn Cyntaf cDNA SweScript RT I yn system gyflawn ar gyfer synthesis cDNA llinyn cyntaf yn effeithlon o mRNA neu gyfanswm

Templedi RNA. Mae'n cynnwys yr holl gydrannau sydd eu hangen ar gyfer synthesis cDNA llinyn 1af, ac mae'n darparu dau fath o breimwyr synthesis cDNA er hwylustod i chi: Yr Hap Hexamer Primer ac Oligo (dT)18 Primer. Gellir defnyddio'r cynhyrchion cDNA un llinyn wedi'u syntheseiddio yn uniongyrchol ar gyfer PCR neu qPCR dilynol. Mae SweScript RT I (Reverse Transcriptase) yn transcriptase gwrthdro mutant sy'n seiliedig ar M-MLV Reverse Transcriptase ac a gafwyd trwy sgrinio esblygiadol in vitro. Mae SweScript RT I yn rhydd o weithgaredd RNase H, sy'n osgoi diraddio RNA yn y templed hybrid DNA / RNA yn ystod adwaith synthesis cDNA llinyn cyntaf, gan sicrhau maint a hyd cDNA llinyn cyntaf wedi'i syntheseiddio. O'i gymharu â'r ensym math gwyllt, mae SweScript RT I wedi gwella sefydlogrwydd thermol ac effeithlonrwydd synthesis yn ddramatig, a gall syntheseiddio cDNAs yn effeithlon yn yr ystod o 42-55 gradd, yn ogystal â cDNAs hyd at 10 kb o hyd.

 

 

Llong gyda rhew gwlyb; Storio ar -20 gradd , yn ddilys am 12 mis.

 

 

Rhif Cydran	Cydran	G3330-50	G3330-100
G3330-1	SweScript RT I Enzyme Mixa	50 μL	100 μL
G3330-2	5 × Clustogfa Adwaith	200 μL	400 μL
G3330-3	Oligo (dT)18 Primer (100 μM)	50 μL	100 μL
G3330-4	Preimio Hexamer ar Hap (100 μM)	50 μL	100 μL
G3330-5	Dŵr Di-Niwclews	1 ml	1 ml
Llawlyfr		Un copi	Un copi

a: gydag Atalydd RNase

b:gyda Chymysgedd dNTP & Mg²+

 

 

Camau synthesis cDNA llinyn cyntaf

1. Paratowyd system adwaith trawsgrifio gwrthdro (argymhellir system adwaith 20 μL)

Cydran	Cyfrol
5 × Clustog Adwaith	4 μL
Oligo (dT)18 Primer (100 μM)	1 μL
neu Hap-Hexamer Primer (100 μM)	neu 1 μL
neu Primer Genynnau Penodol (2 μM)	neu 1 μL
SweScript RT I Enzyme Mix	1 μL
Cyfanswm RNA/mRNA*	0.1 ng-5 ug/10 tud-0.5 ug
Dŵr Di-Niwclews	Ychwanegu at 20 μL

 

Nodyn:Ar gyfer GC uchel neu dempledi cymhleth, argymhellir y gellir cymysgu'r templed RNA, paent preimio trawsgrifio gwrthdro a dŵr di-niwcrelease ymlaen llaw ac yna ei oeri ar rew yn gyflym ar ôl cael ei gadw ar 65 gradd am 5 munud. Ac yna rydych chi'n ychwanegu'r cydrannau eraill.

2. Cymysgwch yn ysgafn a centrifuge.

3. Perfformio trawsgrifiad gwrthdro gan ddefnyddio'r amodau thermol a argymhellir isod:

Tymheredd	Amser
25 gradd a	5 mun
50 gradd b	5-30 mun
85 gradd	5 eiliad

a: Er enghraifft, os gwnaethoch ddefnyddio'r Random Hexamer Primer, deorwch ar 25 gradd am 5 munud, yna perfformiwch y cam dilynol. Os dewiswch ddefnyddio Oligo (dT)18 Primer neu Gene Specific Primer, gallwch ymateb yn uniongyrchol ar 50 gradd .

b: Ar gyfer connet GC uchel neu dempledi cymhleth, gellir gwella'r tymheredd trawsgrifio cefn i 55 gradd.

 

 

1. Gwisgwch fenig tafladwy wrth drin i osgoi halogiad RNase.

2. Gellir storio'r cynhyrchion trawsgrifio cefn ar -20 gradd am gyfnod byr. Os oes angen storio hirdymor, argymhellir storio ar -80 gradd ar ôl pacio ac osgoi cylchoedd rhewi-dadmer dro ar ôl tro.

3. Os yw'r templed o darddiad ewcaryotig, argymhellir dewis Oligo (dT)18 Primer a'i baru â chynffon 3' Poly A mRNA ewcaryotig i gael y cynnyrch uchaf o cDNA hyd llawn.

4. Ar gyfer trawsgrifiad o'r chwith o RNA procaryotig, dylid defnyddio Hap-Hexamer Primer neu Gene Premer Penodol.

5. Mae gan Random Hexamer Primer gymhwysedd eang ac mae'n addas ar gyfer templedi mRNA, rRNA, tRNA, RNA bach a lncRNA.

6. Os dilynir trawsgrifiad o chwith gan assay qPCR, gellir cymysgu Oligo (dT)18 Primer a Random Hexamer Primer i Gyflawni'r un effeithlonrwydd synthesis cDNA ym mhob rhanbarth o mRNA, sy'n helpu i wella dilysrwydd ac ailadroddadwyedd canlyniadau meintiol.

 

At Ddefnydd Ymchwil yn Unig!

 

 

Tagiau poblogaidd: swescript rt i llinyn cyntaf cdna cit synthesis, Tsieina swescript rt i llinyn cyntaf cdna synthesis pecyn gweithgynhyrchwyr, cyflenwyr, ffatri